Los trozos de ADN se copian cada vez que el gérmenes Dividir para producir muchas copias idénticas.
El ADN en la bacteria individual clones? luego se descompone en fragmentos aún más pequeños y superpuestos. Cada fragmento tiene 500 pares de bases de largo, por lo que tienen un tamaño más manejable para la secuenciación.
Estos fragmentos se colocan en un vector? que tiene una secuencia de ADN conocida.
Luego se secuencian los fragmentos de ADN, comenzando con la secuencia conocida del vector y extendiéndose hacia la secuencia desconocida del ADN.
Siguiente secuenciación, los pequeños fragmentos de ADN se juntan identificando áreas de superposición para reformar los grandes trozos que se insertaron originalmente en los BAC.
Este «ensamblaje» se lleva a cabo mediante computadoras que detectan áreas de superposición y unen la secuencia de ADN.
Luego, siguiendo el mapa construido al principio, los trozos grandes se pueden ensamblar nuevamente en los cromosomas como parte de la secuencia completa del genoma.
El enfoque clon por clon se utilizó durante las décadas de 1980 y 1990 para secuenciar los genomas del gusano nematodo, C. elegans, y la levadura, S. cerevisiae.
La secuenciación clon por clon fue el método preferido durante el Proyecto Genoma Humano, que se completó en 2001.
¿Cuáles son las ventajas de la secuenciación clon por clon?
Cada fragmento de ADN se toma de una región conocida del genoma, por lo que es relativamente fácil determinar dónde hay lagunas en la secuencia.
El montaje es más fiable porque un Mapa del genoma se sigue para que los científicos sepan dónde están los fragmentos más grandes en relación entre sí.
Como cada fragmento es distinto, muchas personas pueden trabajar en el genoma a la vez.
¿Cuáles son las desventajas de la secuenciación clon por clon?
Hacer clones y generar mapas genómicos lleva mucho tiempo.
La secuenciación clon por clon es generalmente más costosa que otros métodos de secuenciación.
Algunas partes de los cromosomas, como los centrómeros, son difíciles de clonar. Esto se debe a que contienen secciones largas y repetitivas, lo que dificulta su corte y clonación en BAC. Como resultado, no se puede secuenciar utilizando métodos de secuenciación clon por clon.