¿Qué son las bibliotecas BAC?

¿Qué es un BAC?

  • BAC significa Bacterial Artificial Chromosome.
  • Estos son pequeños trozos de bacteriano ADN que pueden ser identificados y copiados dentro de una célula bacteriana.
  • Un BAC actúa como un vector? para transportar artificialmente el ADN a la célula de una bacteria, como Escherichia coli?, para hacer un BAC clon.

Placas de crecimiento de colonias de Escherichia coli Crédito de la imagen: Wikimedia Commons

  • En general, los clones de BAC llevan insertos de ADN de hasta 200.000 pares de bases largo.
  • Las bacterias se cultivan para producir colonias que contienen el mismo fragmento de ADN en cada célula.
  • Los clones de BAC se pueden almacenar hasta que sea necesario, esta es una biblioteca BAC.
  • Estos fragmentos son mucho más simples de secuenciar que tratar de abordar un todo. genoma.

Hacer una biblioteca BAC

  1. Para hacer una biblioteca genómica de cromosomas artificiales bacterianos (BAC), primero debe aislar las células que contienen el ADN que desea almacenar. Para las bibliotecas BAC animales y humanas, el ADN normalmente proviene de glóbulos blancos.
  2. Estas células aisladas se mezclan con agarosa caliente, una sustancia gelatinosa.
  3. Toda la mezcla se vierte en un molde para producir un conjunto de pequeños bloques, cada uno con miles de células aisladas.
  4. Luego, las células se tratan con enzimas para disolver sus membranas celulares y liberar el ADN en el Gel de agarosa.
  5. Un corte de ADN enzima se utiliza para cortar el ADN en pedazos de alrededor de 200.000 pares de bases de longitud.
  6. Estos bloques de gel que contienen ADN picado se insertan en agujeros en una losa de gel de agarosa. Los fragmentos de ADN se separan según el tamaño por electroforesis.
  7. En el otro lado del gel se inserta una solución de «marcadores». Estos son fragmentos de ADN de tamaño conocido que se pueden utilizar para ayudar a identificar fragmentos de ADN de un tamaño particular. Esto asegura que la biblioteca BAC esté hecha de fragmentos de ADN de un rango de tamaño particular. Estas secciones del gel se cortan y se extraen los fragmentos de ADN.
  8. Estos fragmentos de ADN se insertan en un vector BAC utilizando una enzima llamada ligasa para unir los dos trozos de ADN. Ahora se llaman clones BAC.
  9. Los clones de BAC se agregan a las células bacterianas, generalmente E. coli.
  10. Las bacterias se propagan en placas ricas en nutrientes que permiten que solo crezcan las bacterias que llevan clones de BAC.
  11. Las bacterias crecen rápidamente, lo que resulta en muchas células bacterianas, cada una de las cuales contiene una copia del clon BAC.
  12. Después de que han crecido, las bacterias se «recogen» en placas de 96 o 384 para que cada tubo contenga un solo clon de BAC.
  13. Las bacterias también se pueden copiar o congelar y mantener hasta que los investigadores estén listos para usar el ADN para secuenciación.
  14. Se ha creado una biblioteca BAC.